Геном вируса гриппа сегментирован. Каждый сегмент кодирует один или несколько вирусных белков. Поэтому критически важной стадией жизненного цикла вируса является правильная упаковка всех геномных сегментов в вирионы. Концевые участки каждой молекулы РНК содержат некодирующие последовательности уникальные для каждого сегмента. Считается, что именно эти последовательности являются сигналами упаковки РНК в вирионы.
Авторы использовали набор из 8 плазмид pPR, кодирующих сегменты генома вируса гриппа A/WSN/33 (H1N1). Для этих плазмид последовательно заменяли некодирующие участки шестого сегмента на некодирующие участки других сегментов этого же вируса методом сайт направленного мутагенеза. Затем, методом обратной генетики, получали жизнеспособный и вирулентный вирус. Полученные химерные вирусы авторы называли по некодирующим участкам, полученным шестым сегментом: X-NA-X (например, PB2-NA-PB2).
Для химерных вирусов изначально наблюдалось снижение инфекционного титра, которое восстанавливалось до уровня дикого вируса на протяжении 3-9 пассажей. Количественный учет в qPCR содержания вирусной РНК NA, мРНК NA и белка NA по его активности выявил дефект на уровне трансляции. Причем, чем сильнее был исходный дефект, тем быстрее он «залечивался». Этот эффект, не обнаруживался только для химер HA-NA-HA и PB1-NA-PB1.
Авторы делают два главных вывода: 1) Не существует строгой необходимости соответствия между сигналами упаковки в кодирующей и некодирующей частях сегментов. 2) Вирусы гриппа А, имеющие два сегмента с идентичными некодирующими областями являются вирулентными, по крайней мере, если дублером является сегмент 6.
Crescenzo-Chaigne B., Barbezange C. V. S., Léandri S., Roquin C., Berthault C., van der Werf S. Incorporation of the influenza A virus NA segment into virions does not require cognate non-coding sequences // ScientificRepjprts. 2017 Feb 27;7:43462. doi: 10.1038/srep43462.
https://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed/28240311
Перевод подготовил Петров Сергей
/
Новости
